Hier untersuchten wir die natürliche Vielfalt von Mustern der RSV-Genexpression, indem wir qPCR zur Messung von mRNA-Überfluss von fünf verschiedenen RSV-Genen [nichtstrukturelle Gene eins und zwei (NS1, NS2), Nukleocapsid (N), Anhang (G) und Fusion (F)] aus Isolaten, die wir sequenziert haben, gehören zu beiden Untergruppen und vier Genotypen (RSV/A/GA1, RSV/A/ON, RSV/B/GB1, RSV/B/BA). Genotypabhängige Muster wurden beobachtet, die alle von einem Gradienten abwichen und alle höhere G-mRNA-Werte zeigten als erwartet. Transkriptsstabilitäten berücksichtigten nicht die Nicht-Gradientenmuster, was darauf hindeutet, dass mRNA-Spiegel die Transkription mehr widerspiegeln als zerfallen. Wir schlagen neuartige Modelle vor, die die möglichen Auswirkungen der stochastischen Transkription und/oder das Recycling von transkribierenden Polymerasen enthalten, um mit der Rationalisierung der RSV-Transkription ohne Gradienten zu beginnen. Fearns, R. & Collins, P. L. Role of the M2-1 transcription antitermination protein of respiratory syncytial virus in sequential transcription. J. Virol. 73, 5852–5864 (1999). Nachdem wir festgestellt hatten, dass IBAGs RSV mRNA konzentrieren, untersuchten wir als nächstes das Vorhandensein zellulärer Proteine, die an der Translation in IBs beteiligt sind.

Mit Hilfe der Immunfärbung beobachteten wir IB-interne Flecken von Poly(A)-bindendem Protein (PABP) und eukaryotischem Translationsinitiationsfaktor 4 G (eIF4G), die beide an der Translationsinitiierung beteiligt sind (Abb. 3). Im Gegensatz dazu wurden das kleine ribosomale Subunit-Protein S6, das große ribosomale Subunit-Protein L4 und der Polypeptid-Freisetzungsfaktor eRF1, ein Translationsbeendigungsfaktor, im gesamten Zytoplasma, aber nicht in IBs nachgewiesen (Abb. 3). Insgesamt deuten diese Ergebnisse stark darauf hin, dass ibaGs trotz des Vorhandenseins von viralen mRNAs und zellulären Proteinen des Vorinitiationskomplexes kein Ort viraler mRNA-Translation sind. Basierend auf unseren Daten schlagen wir das folgende Modell für viralen mRNA- und M2-1-Handel vor (Abb. 9). Der Ausschluss der N-, P- und L-Proteine sowie der viralen genomischen RNA aus den IBAGs legt nahe, dass virale Transkription und Replikation nicht in diesen Strukturen stattfinden, sondern höchstwahrscheinlich in anderen IB-Bereichen auftreten. Dann, kurz nach der Synthese, akkumulieren sich virale mRNAs in IBAGs, was zu (i) der fast exklusiven Lokalisierung der IB-viralen mRNA in IBAGs und (ii) der Konzentration neu synthetisierter viraler RNA in IBAGs führt. M2-1 wurde vorgeschlagen, aufkeimende virale mRNA zu binden, da sie bevorzugt an Poly(A)-Sequenzen bindet15. Unsere Daten deuten darauf hin, dass M2-1 an die veröffentlichten mRNAs gebunden bleibt, da sie sich auf IBAGs konzentrieren.

Wie unsere Pulsjagdexperimente zeigen, werden neu synthetisierte virale mRNAs nur durch IBAGs geleitet, da IBAGs nicht ihr endgültiges Ziel sind. Darüber hinaus fehlen ribosomale Proteine (S6 und L4) und der eRF1-Translationsbeendigungsfaktor in IBs, was darauf hindeutet, dass in diesen Bereichen keine Übersetzung erfolgt. Diese Ergebnisse stehen im Widerspruch zu früheren Erkenntnissen über VSV, die zeigen, dass der zytoplasmatische Export viraler mRNAs für ihre Übersetzung notwendig ist20.

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